Капельная цифровая ПЦР (ddPCR)

Цифровая полимеразная цепная реакция (цПЦР) представляет собой биотехнологическое усовершенствование традиционных методов полимеразной цепной реакции, которые можно использовать для прямого количественного определения и клональной амплификации нитей нуклеиновых кислот, включая ДНК, кДНК или РНК.Основное различие между цПЦР и традиционной ПЦР заключается в методе измерения количества нуклеиновых кислот, при этом первый является более точным методом, чем ПЦР.Как и в ПЦР, в дПЦР в образце также проводится одна реакция, но образец делится на множество разделов, при этом реакция проводится в каждом разделе отдельно.При таком разделении количество нуклеиновых кислот может быть собрано и измерено более точно и чувствительно.Этот метод регулярно используется для клональной амплификации материалов для секвенирования следующего поколения и показал свою эффективность для анализа изменений в последовательностях генов, включая варианты числа копий и точечные мутации.Капельная цифровая ПЦР (ддПЦР) — это метод дПЦР, при котором реакционная смесь образца объемом 20 мкл разделяется на 20 000 масляных капель размером в нанолитр с использованием метода водно-масляной эмульсии, подвергается термоциклированию в микрофлюидном картридже, а амплитуда флуоресценции каждой капли измеряется в каждая лунка с образцом считывается с помощью сканера капель.